大家好，我是小典，我来为大家解答以上问题。基因测序公司，基因测序很多人还不知道，现在让我们一起来看看吧！
1、DNA测序的方法有很多种. 目前最常见的是双脱氧终止法了. 在测序用的缓冲液中含有四种dNTP及聚合酶. 测序时分成四个反应, 每个反应除上述成分外分别加入2,3-双脱氧的A, C, G, T核苷三磷酸(称为ddATP, ddCTP, ddGTP, ddTTP), 然后进行聚合反应. 在第一个反应物中, ddATP会随机地代替dATP参加反应一旦ddATP加入了新合成的DNA链, 由于其3位的羟基变成了氢, 所以不能继续延伸. 所以第一个反应中所产生的DNA链都是到A就终止了; 同理第二个反应产生的都是以C结尾的; 第三个反应的都以G结尾, 第四个反应的都以T结尾, 电泳后就可以读出序列了. 也许这样说你不一定明白. 举一个例子, 假如有一个DNA, 互补序列是GATCCGAT, 我们试着做一下:
2、在第一个反应中由于含有dNTP+ddATP, 所以遇到G, T, C三个碱基时没什么问题, 但遇到A时, 掺入的可能是dATP或ddATP, 比如已合成到G, 下一个如果参与反应的是ddATP则终止, 产生一个仅有2个核苷酸的序列: GA, 否则继续延伸, 可以产生序列GATCCG, 又到了下一个A了. 同样有两种情况, 如果是ddATP掺入, 则产生的序列是GATCCGA, 延伸终止, 否则可以继续延伸, 产生GATCCGAT.
3、所以在第一个反应系统中产生的都是以A结尾的片段:
4、GA, GATCCGA,
5、同理在第二个反应中产生的都是以C结尾的片段:
6、GATC, GATCC,
7、在第三个反应中产生的都是以G结尾的片段:
8、G, GATCCG
9、在第四个反应中产生的都是以T结尾的片段:
10、GAT, GATCCGAT,
11、电泳时按分子量大小排列, A反应的片段长度为2, 7; C反应的为4, 5; G反应的为1, 6; T反应的为3, 8, 四个反应的产物分别电泳, 结果为
12、8 7 6 5 4 3 2 1
13、A | |
14、C | |
15、G | |
16、T | |
17、我们可以从右向左读, 为GATCCGAT, 至此, 测序完成
本文到此讲解完毕了，希望对大家有帮助。